本发明涉及一种利用液体培养基繁殖果蝇的方法及装置,包括如下步骤:(1)配制液体培养基;(2)使用果蝇笼方式饲养成蝇;(3)饲养幼虫并获得蝇卵:(3-1)制作饲养果蝇幼虫的饲养罐;(3-2)将液体培养基加入至饲养罐;(3-3)将饲养罐放入蝇笼;(3-4)获得果蝇卵;(4)饲养至果蝇幼虫老熟后,洗脱并过滤收集老熟幼虫;(5)置于袋中,待果蝇幼虫化蛹后,将果蝇蛹连同袋剪下,获得无损伤的果蝇蛹。本发明的方法和装置易于获得果蝇的各虫态,尤其是老龄幼虫和果蝇蛹,获得的果蝇老龄幼虫和蛹表面清洁,蛹体完整,无破损。
1.一种利用液体培养基繁殖果蝇的方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)配制液体培养基;(2)使用果蝇笼方式饲养成蝇;(3)饲养幼虫并获得蝇卵:(3-1)制作饲养果蝇幼虫的饲养罐;(3-2)将液体培养基加入至饲养罐;(3-3)将饲养罐放入果蝇笼;(3-4)获得果蝇卵;(4)饲养至果蝇幼虫老熟后,洗脱并过滤收集老熟幼虫;(5)置于袋中,待果蝇幼虫化蛹后,将果蝇蛹连同袋剪下,获得无损伤的果蝇蛹。
2.如权利要求1所述的利用液体培养基繁殖果蝇的方法,其特征在于,步骤(1)中包括:(1-1)配制液体培养基:培养基的组分和配比为:酵母粉5份:蔗糖55份:玉米粉51份:水500份;(1-2)培养基的保存和备用。
3.如权利要求2所述的利用液体培养基繁殖果蝇的方法,其特征在于,步骤(1-1)在培养基配置时,先将水加热煮沸,加入相应量的蔗糖和玉米粉,充分混匀后冷却至常温,再加入酵母粉并搅拌混匀;和/或,步骤(1-2)中将配置好的培养基放入6°C常规冰箱中备用。
4.如权利要求1-3中任一项所述的利用液体培养基繁殖果蝇的方法,其特征在于,步骤(2)中包括:(2-1)设计果蝇笼;(2-2)在果蝇笼内放置果蝇成虫。
5.如权利要求4所述的利用液体培养基繁殖果蝇的方法,其特征在于,步骤(2-1)中,用100目尼龙网制作边长为50厘米的立方体果蝇笼主体,果蝇笼主体侧面开一直径约15cm的笼孔,将用100目尼龙网制作的套筒与笼孔孔沿缝合,套筒处用绳索扎紧;步骤(2-2)中,在果蝇笼内放置黑腹果蝇成虫约1000头。
6.如权利要求5所述的利用液体培养基繁殖果蝇的方法,其特征在于,步骤(3)中:(3-1)中制作饲养果蝇幼虫的透气饲养罐:在容积为300mL圆柱形透明塑料罐内进行饲养,罐口的螺旋盖中间开一个直径约为6cm的圆孔,封以100目尼龙网,用于饲养罐的透气;(3-2)将液体培养基加入至饲养罐并在培养基上方铺设纱布:饲养罐内放入上述的培养基约50mL,然后在培养基表面加入圆形纱布片两片,用于果蝇产卵和幼虫附着;(3-3)将饲养罐放入果蝇笼并定期更换:将饲养罐放入果蝇笼,每12小时定期取出并以上述螺旋盖盖紧,并更换含有新鲜培养基的饲养罐;每天将螺旋盖打开,用喷瓶喷洒少量水,以防止纱布表面失水干燥;(3-4)获得果蝇卵。
7.如权利要求6所述的利用液体培养基繁殖果蝇的方法,其特征在于,步骤(4)中:以水洗方式洗脱并过滤收集老熟幼虫;和/或,饲养4天后,饲养罐内已经出现少量果蝇化蛹,大部分幼虫进入老龄阶段;将饲养罐内的液体培养基连同纱布一起倒入水盆中,盆内放约25°C的温水,震荡使得果蝇幼虫脱落并取出纱布,使用40目尼龙网做成的网筛过滤,去除培养基残渣。
8.如权利要求7所述的利用液体培养基繁殖果蝇的方法,其特征在于,步骤(5)中:置于食品保鲜袋中,用吸水纸吸取幼虫表面的较大水滴,袋口处不封扎;2天后,袋内果蝇幼虫化蛹,使用剪刀将果蝇蛹连同塑料袋剪下,获得无损伤的果蝇蛹。
9.如权利要求8所述的利用液体培养基繁殖果蝇方法的装置,其特征在于,其为饲养罐,包括尼龙网,螺旋盖和罐体,其中,罐体为圆柱形透明塑料罐,螺旋盖设置在罐体的罐口,尼龙网设置于螺旋盖中央的圆孔上。
10.如权利要求9所述利用液体培养基繁殖果蝇方法的装置,其特征在于,所述圆柱形透明塑料罐直径约为8cm、高约为6cm,所述圆孔为螺旋盖中央使用热切刀切的一直径约为6cm的圆孔,其采用热熔胶枪封以100目所述尼龙网;和/或,还包括2层圆形纱布,用于盖在培养基表面使果蝇产卵和幼虫附着。技术领域
本发明涉及生物技术领域,具体涉及一种利用液体培养基繁殖果蝇的方法及装置。
背景技术
果蝇属于果蝇科Drosophilidae昆虫;该类昆虫腐生性,广泛分布于全球温带和热带等气候区,是生活中常见昆虫;其中的黑腹果蝇Drosophilaxa0melanogaster、铃木氏果蝇D.suzukii和海德氏果蝇D.hydei等是樱桃和杨梅等水果上重要害虫。在果园,果蝇危害成熟或开始腐烂的果实,成虫将卵产在果实表面或果皮下,卵孵化后以幼虫蛀食为害;随着幼虫的蛀食,果实逐渐软化、变褐、腐烂并脱落。果蝇的危害影响着相关水果的产量;同时果蝇还影响到相关果实的鲜销,果实上果蝇幼虫的存在导致相关水果价格明显下跌。果园果蝇的治理目前主要通过化学、物理机械和农业防治等方法。化学防治方法主要利用化学药剂的生物活性控制害虫;物理机械防治方法利用光、热等物理因子以及应用机械或其它工具对害虫进行控制,如利用诱虫液、粘虫板、性诱芯等;农业防治方法是指利用一系列耕作栽培的管理技术,如果园选址、管理和果实采收等环节。除了上述的方法之外,生物防治方法也是控制害虫爆发的重要方法,生物防治方法是指利用天敌来控制害虫的方法。在利用上述方法对果蝇进行研究时,一般需要大量繁殖果蝇,获得特定虫态或特定发育阶段的果蝇。以生物防治方法为例,在利用寄生蜂开展对果蝇的生物防治时,对果蝇寄生蜂天敌进行规模化繁殖以及对寄生蜂的寄生效果进行评价是关键环节之一。一些寄生蜂常常仅针对于特定的虫态,如蝇蛹金小蜂Pachycrepoideusxa0vindemmiae为果蝇的蛹期寄生蜂,对该寄生蜂的繁殖以及寄生效果的评价均需要大量的果蝇蛹。在已有的果蝇繁殖技术中,果蝇的培养均依赖于固体培养基,如中国专利(公开号CN102578052A)提出的杨梅果蝇繁殖时,在液体培养基中加入琼脂,固体培养基表面使用喷瓶喷以鲜奶和橙汁;中国专利(公开号CN102342376)提出实验室用的一种麦麸培养基,也为固体培养基。一些文献中也均在培养基中加入琼脂以及其它组分,来饲养果蝇。固体培养基方法在实验室小规模饲养果蝇用于科研时,具有一定的优势,如果蝇可以在加有固体培养基的果蝇管内较长时间保种并繁殖。但在大量饲养果蝇并获取特定虫态(如蛹)时,却难以有效获得完整的果蝇蛹,降低了生产效率。果蝇蛹为围蛹类型,长度约3mm,蛹表面为薄薄的蛹壳,在蛹壳内为蛹体。果蝇蛹常常附着在培养器皿或培养基表面,在收取果蝇蛹时,常常难以获得完整的果蝇蛹,而果蝇蛹的完整性影响到寄生蜂的寄生率,果蝇蛹的破损率导致寄生蜂的生产效率下降,对寄生蜂寄生效果的评价不够严谨。
发明内容
为了克服传统上固体培养基在培养获得果蝇幼虫上不易分离各虫态果蝇的缺点,本发明提供一种利用液体培养基繁殖果蝇的方法及装置。具体技术方案如下:一种利用液体培养基繁殖果蝇的方法,包括如下步骤:(1)配制液体培养基;(2)使用果蝇笼方式饲养成蝇;(3)饲养幼虫并获得蝇卵:(3-1)制作饲养果蝇幼虫的饲养罐;(3-2)将液体培养基加入至饲养罐;(3-3)将饲养罐放入果蝇笼;(3-4)获得果蝇卵;(4)饲养至果蝇幼虫老熟后,洗脱并过滤收集老熟幼虫;(5)置于袋中,待果蝇幼虫化蛹后,将果蝇蛹连同袋剪下,获得无损伤的果蝇蛹。进一步地,步骤(1)中包括:(1-1)配制液体培养基:培养基的组分和配比为:酵母粉5份:蔗糖55份:玉米粉51份:水500份;(1-2)培养基的保存和备用。进一步地,步骤(1-1)在培养基配置时,先将水加热煮沸,加入相应量的蔗糖和玉米粉,充分混匀后冷却至常温,再加入酵母粉并搅拌混匀;和/或,步骤(1-2)中将配置好的培养基放入6°C常规冰箱中备用。进一步地,步骤(2)中包括:(2-1)设计果蝇笼;(2-2)在果蝇笼内放置果蝇成虫。进一步地,步骤(2-1)中,用100目尼龙网制作边长为50厘米的立方体果蝇笼主体,果蝇笼主体侧面开一直径约15cm的笼孔,将用100目尼龙网制作的套筒与笼孔孔沿缝合,套筒处用绳索扎紧;步骤(2-2)中,在果蝇笼内放置黑腹果蝇成虫约1000头。进一步地,步骤(3)中:(3-1)中制作饲养果蝇幼虫的透气饲养罐:在容积为300mL圆柱形透明塑料罐内进行饲养,罐口的螺旋盖中间开一个直径约为6cm的圆孔,封以100目尼龙网,用于饲养罐的透气;(3-2)将液体培养基加入至饲养罐并在培养基上方铺设纱布:饲养罐内放入上述的培养基约50mL,然后在培养基表面加入圆形纱布片两片,用于果蝇产卵和幼虫附着;(3-3)将饲养罐放入果蝇笼并定期更换:将饲养罐放入果蝇笼,每12小时定期取出并以上述透气螺旋盖盖紧,并更换含有新鲜培养基的饲养罐;每天将螺旋盖打开,用喷瓶喷洒少量水,以防止纱布表面失水干燥;(3-4)获得果蝇卵。进一步地,步骤(4)中:以水洗方式洗脱并过滤收集老熟幼虫;和/或,饲养4天后,饲养罐内已经出现少量果蝇化蛹,大部分幼虫进入老龄阶段;将饲养罐内的液体培养基连同纱布一起倒入水盆中,盆内放约25°C的温水,震荡使得果蝇幼虫脱落并取出纱布,使用40目尼龙网做成的网筛过滤,去除培养基残渣。进一步地,步骤(5)中:置于食品保鲜袋中,用吸水纸吸取幼虫表面的较大水滴,袋口处不封扎;2天后,袋内果蝇幼虫化蛹,使用剪刀将果蝇蛹连同塑料袋剪下,获得无损伤的果蝇蛹。进一步地,其为饲养罐,包括尼龙网,螺旋盖和罐体,其中,罐体为圆柱形透明塑料罐,螺旋盖设置在罐体的罐口,尼龙网设置于螺旋盖中央的圆孔上。进一步地,所述圆柱形透明塑料罐直径约为8cm、高约为6cm,所述圆孔为螺旋盖中央使用热切刀切的一直径约为6cm的圆孔,其采用热熔胶枪封以100目所述尼龙网;和/或,还包括2层圆形纱布,用于盖在培养基表面使果蝇产卵和幼虫附着。与目前现有技术相比,本发明易于获得果蝇的各虫态,尤其是老龄幼虫和果蝇蛹,获得的果蝇老龄幼虫和蛹表面清洁,蛹体完整,无破损。
附图说明
图1为本发明饲养罐示意图
具体实施方式
下面根据附图对本发明进行详细描述,其为本发明多种实施方式中的一种优选实施例。本实施例公开了一种使用液体培养基培养果蝇幼虫以及收集分离并大量获得果蝇幼虫和蛹的方法,并提供了应用该方法所需的装置。具体包括:配制液体培养基并保存备用,使用果蝇笼方式饲养成蝇;制作饲养果蝇幼虫的透气饲养罐,将液体培养基加入至饲养罐并在培养基上方铺设纱布,将饲养罐放入果蝇笼并定期更换,获得果蝇卵;饲养至果蝇幼虫老熟后,以水洗方式洗脱并过滤收集老熟幼虫,置于食品保鲜袋中;果蝇幼虫化蛹后,使用剪刀将果蝇蛹连同塑料袋剪下,获得无损伤的果蝇蛹。具体包括以下步骤:步骤1,配置液体培养基:培养基配方为酵母粉5g、蔗糖55g、玉米粉51和水500g。在培养基配置时,先将水加热煮沸,加入相应量的蔗糖和玉米粉,充分混匀后冷却至常温,再加入酵母粉并搅拌混匀;配置好的培养基放入6°C常规冰箱中备用。步骤2,设计果蝇笼:用100目尼龙网制作边长为50厘米的立方体果蝇笼主体;果蝇笼主体侧面开一直径约15cm的笼孔,将用100目尼龙网制作的套筒与笼孔孔沿缝合,套筒处用绳索扎紧;在果蝇笼内放置黑腹果蝇成虫约1000头。步骤3,卵的获得和幼虫饲养:在容积为300mL圆柱形透明塑料罐内进行饲养,罐口的螺旋盖中间开一个直径约为6cm的圆孔,封以100目尼龙网,用于饲养罐的透气。饲养罐内放入上述的培养基约50mL,然后在培养基表面加入圆形纱布片两片,用于果蝇产卵和幼虫附着;将饲养罐放入果蝇笼,每12小时定期取出并以上述透气螺旋盖盖紧,并更换含有新鲜培养基的饲养罐。每天将螺旋盖打开,用喷瓶喷洒少量水,以防止纱布表面失水干燥。步骤4,老龄幼虫的获得:饲养4天后,饲养罐内已经出现少量果蝇化蛹,大部分幼虫进入老龄阶段;将饲养罐内的液体培养基连同纱布一起倒入水盆中,盆内放约25°C的温水,震荡使得果蝇幼虫脱落并取出纱布,使用40目尼龙网做成的网筛过滤,去除培养基残渣。步骤5,果蝇蛹的获得:将果蝇老龄幼虫置于食品保鲜袋中,用吸水纸吸取幼虫表面的较大水滴,袋口处不封扎;2天后,袋内的果蝇幼虫化蛹,使用小剪刀将果蝇蛹连同塑料袋剪下,获得无损伤的果蝇蛹。步骤1中使用液体培养基配方饲养果蝇幼虫,配方为酵母粉5g、蔗糖55g、玉米粉51和水500g。步骤1中酵母粉待培养基冷却至室温时再予以添加。用100目尼龙网制作果蝇笼,侧面开一直径约15cm的笼孔,将用100目尼龙网制作的套筒与笼孔孔沿缝合,套筒处用绳索扎紧。使用300mL圆柱形透明塑料罐作为饲养罐,罐口的螺旋盖中间开一个直径约为8cm的圆孔,封以100目尼龙网,用于饲养罐的透气。在培养基表面加入圆形纱布片两片,用于果蝇产卵和幼虫附着,每天用喷瓶喷洒少量水,以防止纱布表面失水干燥。使用水洗的方法将老龄幼虫洗脱并使用40目尼龙网做成的网筛过滤,去除培养基残渣,获得老龄幼虫。将果蝇老龄幼虫置于食品保鲜袋中化蛹,连同塑料袋片取下果蝇蛹。本发明中涉及的塑料罐、酵母粉、蔗糖、玉米粉等均源自市场上购买,水为自来水加热煮沸。饲养果蝇幼虫使用的培养罐如附图所示,培养罐使用直径约为8cm、高约为6cm的圆柱形透明塑料罐制作,罐口具有螺旋盖,螺旋盖中央使用热切刀切一直径约为6cm的圆孔,使用热熔胶枪封以100目尼龙网。在罐内添加液体培养基约50mL,培养基表面盖以2圆形层纱布,并使用镊子将纱布铺平。培养基配方为酵母粉5g、蔗糖55g、玉米粉51和水500g。在培养基配置时,先将水加热煮沸,加入相应量的蔗糖和玉米粉,充分混匀后冷却至常温,再加入酵母粉并搅拌混匀;配置好的培养基放入6°C常规冰箱中备用,使用时从冰箱中取出,预热后使用。用100目尼龙网制作边长为50厘米的立方体果蝇笼主体;果蝇笼主体侧面开一直径约15cm的笼孔,将用100目尼龙网制作的套筒与笼孔孔沿缝合,套筒处用绳索扎紧;在果蝇笼内放置黑腹果蝇成虫约1000头。每12小时更换饲养罐并用喷瓶喷洒少量水,以防止纱布表面失水干燥。在25°C下,饲养4天后,塑料罐内已经出现少量果蝇化蛹,大部分幼虫进入老龄阶段;将塑料罐内的液体培养基连同纱布一起倒入水盆中,盆内放约25°C的温水,震荡使得果蝇幼虫脱落并取出纱布,使用40目尼龙网做成的网筛过滤,去除培养基残渣。将果蝇老龄幼虫置于食品保鲜袋中,用吸水纸吸取幼虫表面的较大水滴,袋口处不封扎;2天后,袋内的果蝇幼虫化蛹,使用小剪刀将果蝇蛹连同塑料袋剪下,获得无损伤的果蝇蛹。使用本发明所述的方法,每天可获得无损伤果蝇蛹300头以上,也可根据需要,增加果蝇笼内的成蝇数量,获得更多果蝇幼虫,以满足所需。上面结合附图对本发明进行了示例性描述,显然本发明具体实现并不受上述方式的限制,只要采用了本发明的方法构思和技术方案进行的各种改进,或未经改进直接应用于其它场合的,均在本发明的保护范围之内。